超聲細胞破碎材料與方法

１．１材料與試劑黑桑葚干：新疆和田市絲路果果特產；石油醚（沸程３０～６０℃）、三氯甲烷、正丁醇、９５％乙醇：分析純，天津市德恩化學試劑有限公司。

１．２儀器與設備超聲波細胞破碎儀：ＴＬ－ＳＴ４００型，江蘇天翎儀器有限公司；高速多功能粉碎機：ＲＨＰ－２０００Ａ型，天津榮浩機電設備有限公司；數顯恒溫水浴鍋：ＨＨ－４型，上海樹立儀器儀表有限公司；高速離心機：ＴＣＬ－１６型，常州金壇良友儀器有限公司；粗脂肪測定儀：ＳＺＦ－０６Ａ型，上海洪紀儀器設備有限公司；電熱鼓風干燥箱：ＤＧＨ－９１４０Ａ型，上海一恒科學儀器有限公司。

１．３方法

１．３．１桑葚樣品處理將桑葚干樣品烘干至恒重，粉碎，過７０目篩后密封保存備用。１．３．２脫脂參照ＧＢ５００９．６—２０１６并修改。稱取處理好的桑葚樣品４．０００ｇ，水浴溫度７０℃回流抽提４ｈ，控制每分鐘８０滴左右。脫脂后濾掉廢液得桑葚樣品。１．３．３細胞破碎儀輔助熱水浸提桑葚多糖稱取脫脂后的桑葚樣品１．０００ｇ，按料液比１:３０（ｇ／ｍＬ）加入蒸餾水，６５℃恒溫水浴鍋中用細胞破碎儀輔助浸提，將超聲波細胞破碎儀變幅桿末端插入液面８ｍｍ并使其位于容器中心位置。變幅桿轉換開關打到Φ６，設置超聲時間１．２ｓ，間歇時間１．５ｓ，用紗布過濾混合物，３５００ｒ／ｍｉｎ離心１０ｍｉｎ，收集上清液，６５℃水浴濃縮至液體體積為１０ｍＬ。

１．３．４桑葚多糖的脫蛋白根據文獻稍作修改：將濃縮后的桑葚樣品置于分液漏斗中，按體積比１:２加入Ｓｅｖａｇ試劑（Ｖ三氯甲烷:Ｖ正丁醇＝４:１），充分搖勻，靜置，待分液漏斗中液體分層完畢后，除去底層的有機溶劑及中間層的蛋白質，收集上層液，３５００ｒ／ｍｉｎ離心１０ｍｉｎ，除去殘留蛋白質，收集上清液備用。１．３．５桑葚多糖的制備向脫蛋白后的上清液中加入４倍體積９５％乙醇，混勻靜置片刻后沉淀析出，３５００ｒ／ｍｉｎ離心１０ｍｉｎ，棄上清，將沉淀放置于蒸發皿中，６５℃干燥１．５ｈ，即為桑葚多糖提取物。